检测到阳性结果,然后呢?
尽管所有实验动物管理人员都不希望拿到一份微生物检测阳性的报告,但实际上,这种情况无法避免。那拿到阳性报告后我们应该怎么办呢?
在采取任何行动之前,需要第一时间联系检测实验室,确认应如何解读阳性报告。虽然大多数情况下,“阳性”意味着感染的存在,但并非所有的“阳性”结果都是可靠的,即使结果可靠有些时候也并不意味着动物(正在)发生感染,甚至有些时候,动物正在感染某种病原体,也并不意味着一定要采取干预措施。这取决于多个因素,包括病原体的特性、检测方法的选择、检测工作的质控过程、检测试剂的可靠性等。和检测实验室的充分沟通可以更准确的了解检测报告中的“阳性”的可靠性和意义,以便决定后续应对措施。
有一些病原体感染具有自限性(例如MHV、仙台病毒等),因此在感染后期,常会出现核酸检测是阴性但抗体检测是阳性的情况;而另一些病原体(例如牛棒状杆菌、MNV等)常会呈现持续性感染,即使没有临床症状,也会长期排毒/菌;采集环境样本检测到某种病原体核酸阳性可能是由于新发生的感染所致,也可能是既往感染或其它原因残留的核酸所致;绝大多数情况下血清学检测结果都是可靠的,但是偶尔也会有交叉反应所导致的假阳性结果;检测实验室的质控水平和试剂的稳定性更是直接决定结果是否可靠。
在确认首次报告的阳性结果的可信度后,可能会需要扩大检测范围、重新采样或更换检测方法才能确认被检测动物是否感染。确认感染后,依然会有诸多因素影响管理者的决策:
01被检测到阳性的动物来源
尚处于检疫期的动物中如果检测到阳性结果,往往会被拒绝进入设施;如果是已经处于实验中的动物则会根据检测到的病原体种类再做决定,例如是否人兽共患病原体,是否影响动物健康,是否影响实验数据等;如果是生产性质的设施,通常需要立即采取隔离措施,必要时扑杀和(或)重新净化动物,同时对环境进行彻底清洁消毒。
02检测到的病原体种类
如果检测到的病原体是人兽共患病原,例如汉坦病毒、结核分枝杆菌等,则应该立即采取措施,隔离并扑杀阳性动物。同时要密切监测与其有直接或间接接触的同一微生物单元的其它阴性动物,如果是非人灵长类动物,对每一个体都应该进行检测。
而对于那些对动物健康有影响或者对实验数据有重要影响的病原体,也应该立即扩大筛查范围,隔离发生感染的微生物单元,停止繁殖和新引进动物,淘汰所有非必要的动物,对珍贵品系,可重新净化。例如发生小鼠肝炎病毒感染或牛棒状杆菌感染,由于它们感染免疫缺陷动物后临床症状明显,且显著影响实验,大多数管理者都会选择查明感染源和感染范围,采取措施清除感染。而遇到MNV时,一些设施负责人则会选择截然不同的策略,免疫正常和大多数免疫缺陷小鼠感染MNV后不会表现临床症状,仅干扰素α、β、γ受体和STAT1基因缺失的小鼠感染MNV后会出现体重减轻、竖毛和弓背等全身性疾病,且有较高死亡率。此外,MNV对巨噬细胞和树突状细胞的趋向性可能会改变免疫反应影响免疫相关研究,还可能会干扰涉及肠道疾病的研究。因此不饲养相关小鼠和不做相关研究的设施并不会把MNV作为自己的监测项目;而另一些设施尽管也监测这一项目,但仅仅是为了了解动物感染情况,实行“分级管理”,并不会一刀切地将所有阳性动物都拒之门外;当然,也有管理者严格要求所有动物必须为阴性,发生感染后会采取清除措施。上述“分级管理”的策略尽管是一种妥协,但在现有条件下可能会更符合大多数管理者的理念。
此外发生感染后在设施内的流行率也会影响决策,例如,在现代设施中如果动物群体中存在呼肠孤病毒-3型感染,流行率也只会维持在非常低的水平,但如果发生MHV感染,即使IVC笼架可以很大程度上减少不同笼(架)动物之间的交叉污染,但由于其极强的传播效率,流行率也可以轻松突破50%。因此对于传播性弱,流行率低的病原体,管理者往往更能容忍。
另外,如果你的动物供应商无法提供特定病原体阴性的动物,也没有办法将其从你的设施清除。近几年,越来越多的机构从出现皮屑症状的小鼠中分离到木糖葡萄球菌,作为一种条件致病菌,其在小鼠皮肤表面有非常高的检出率,美国Charles River实验室近年公布的数据显示阳性率为51.8%(n=1426),我国第三方检测机构苏州西山生物的检测阳性率为43.2%(n=192),几乎所有的动物供应商都没有将木糖葡萄球菌列入自己的应排除病原体清单或常规监测清单。在这一背景下,即使检测到阳性结果,除了对出现症状的动物进行处理外,并无更多选择。
03设施的基本情况
设施情况很多时候也严重影响管理者的决策,包括设施和种群总规模,发生污染的区域和种群大小,人力资源是否充足,是否有足够空间,技术储备是否充分,项目负责人是否支持和配合等。对阳性动物进行排查和处理是一系列高度专业性的操作,所有参与者之间都要密切配合精密运转,任何环节的细微漏洞都会让清除工作功亏一篑。
04预算
预算则是最不可忽视的一点,不论是筛查确认感染范围、淘汰感染动物、空间和笼器具的清洗消毒、重新净化或引进动物、处理后的动物和环境的确认等都需要不菲的成本。也正是由于一旦发生感染,后续处理成本高昂,对实验项目的影响大,故而实验动物从业人员的普遍共识是预防重于治理。
综上所述,在检测报告中出现阳性结果后,首先应确认检测结果的可靠性并正确解读报告,如果确认动物感染,则需要管理者根据感染动物的来源、病原体种类、设施的基本情况、预算等多个因素综合考虑,决定是容忍该病原体在自己的设施内有一定程度的流行,还是必须清除。